蔡司Apotome 3
寬場顯微鏡熒光成像的光學(xué)切片
為您的熒光樣品創(chuàng)建光學(xué)切片——無雜散光。利用結(jié)構(gòu)照明，可以簡單有效地消除非焦平面雜散光，便于專注于科學(xué)研究。蔡司Apotome 3能夠識別放大倍率并將適當(dāng)?shù)臇鸥褚浦凉饴分?。隨后，系統(tǒng)會從不同柵格位置的多幅圖像中計算出光學(xué)切片圖像。它是一種非常有效的消除非焦平面雜散光的方法，同樣適用于比較厚的樣品。系統(tǒng)操作非常簡便。優(yōu)質(zhì)的光學(xué)切片——讓您獲得出色分辨率和高對比度圖像。
優(yōu)質(zhì)的光學(xué)切片：蔡司Apotome 3具有三種不同幾何性狀的柵格，無論您選擇何種放大倍率，都可以保證高分辨率。
自由選擇光源和染料：蔡司Apotome 3可適應(yīng)熒光團和光源。因此，當(dāng)實驗的復(fù)雜性和需求發(fā)生變化時，您也可以靈活應(yīng)對。
更多結(jié)構(gòu)化信息：憑借結(jié)構(gòu)照明算法，您甚至可通過反卷積進一步改善圖像質(zhì)量。更好地識別所檢查對象的重要結(jié)構(gòu)。
優(yōu)勢
優(yōu)質(zhì)的光學(xué)切片
要對尺寸從幾百微米到幾納米范圍內(nèi)的結(jié)構(gòu)進行成像，通常需要不同放大倍數(shù)的物鏡。Apotome 3具有三種不同幾何形狀的柵格，可保證每一顆物鏡成像的高分辨率。您只需要關(guān)注實驗本身，因為系統(tǒng)可自動選擇合適的柵格，時刻確保獲得高對比度的光學(xué)切片。與傳統(tǒng)寬場熒光顯微圖像相比，Apotome 3能夠顯著提高軸向分辨率：您可以獲得支持三維渲染的優(yōu)質(zhì)光學(xué)切片，厚的樣品也不例外。
自由選擇光源和染料
實驗的復(fù)雜性和需求往往隨著時間發(fā)生變化。因此您的設(shè)備不僅需要注重性能，還應(yīng)具有靈活性。將Apotome 3與傳統(tǒng)的金屬鹵化物燈、經(jīng)濟型LED白光光源或柔光、多色Colibri照明系統(tǒng)結(jié)合使用。使用時僅需更換濾色片，系統(tǒng)便會自動將柵格移至正確位置。任何染料都不受技術(shù)上的制約：不論是DAPI、Alexa488、Rhodamin、Cy5還是活體染料，如GFP或mCherry——Apotome 3都能夠適應(yīng)熒光和光源，生成您期望的優(yōu)質(zhì)清晰圖像。
更多結(jié)構(gòu)化信息
憑借結(jié)構(gòu)照明的算法，您甚至可以借助蔡司Apotome 3通過反卷積進一步改善圖像質(zhì)量。在保留所有原始數(shù)據(jù)的同時，該系統(tǒng)還允許在寬場、光學(xué)切片以及反卷積的圖像之間切換，實現(xiàn)出色的靈活性和兼容性。反卷積算法快速、穩(wěn)健且易于使用，能夠改善圖像的橫向和軸向分辨率。因?qū)Ρ榷雀纳?、光學(xué)分辨率更高且現(xiàn)有噪聲得到抑制，您可以更好地識別樣品更細(xì)微的結(jié)構(gòu)。
工作原理
優(yōu)化光學(xué)切片厚度的三種柵格
您的相機能夠檢測到焦平面以外的光。根據(jù)試樣的厚度和體積降低對比度和分辨率（圖A：通過傳統(tǒng)反射熒光照明法獲取圖像）。
蔡司Apotome 3可自動將匹配的柵格放入顯微鏡光路中，不受放大倍數(shù)的影響。減少不需要的背景熒光能夠增加?xùn)鸥竦念l率，使光學(xué)切片變得更薄。來自焦平面以外的圖像信息則受到抑制（圖B、C和D），因此改善了光學(xué)切片的對比度和分辨率。示例（圖D）中，“低柵格”可優(yōu)化切片厚度。此類圖像尤其適用于3D分析以及通過渲染軟件處理圖像數(shù)據(jù)。
秀麗隱桿線蟲，全樣載片，綠色：GFP，藍(lán)色；DAPI，物鏡：Plan-Apochromat 20 ×/0.8 視頻由德國布倫瑞克工業(yè)大學(xué)的Schnabel教授提供。
掃描機理
蔡司Apotome 3將柵格結(jié)構(gòu)投射到樣品的焦平面，隨后使用掃描機構(gòu)將其移至不同位置。Apotome 3在每一柵格位置都能夠自動獲取一張數(shù)字圖像。系統(tǒng)使用算法將所有的圖像處理成一個具有高對比度和分辨率的光學(xué)切片。產(chǎn)生的圖像無柵格結(jié)構(gòu)。
熒光激發(fā)光會穿過Apotome 3載玻片中的兩塊玻璃板。當(dāng)柵格結(jié)構(gòu)應(yīng)用于塊玻璃板時，柵格圖案會被投影激發(fā)光中。掃描組件機構(gòu)會傾斜第二塊玻璃板，柵格圖像便在樣品的焦平面內(nèi)平移。
柵格投影示意圖。A：寬場圖像。B – D：不同柵格位置的原始圖像。E：通過樣品得到的光學(xué)切片。結(jié)構(gòu)化照明可以有效地消除焦外雜散光（箭頭所示）。
典型應(yīng)用
| 細(xì)胞培養(yǎng) | 二維成像 | 二維單幅圖像 |
| 二維圖像快速成像 | 顯示器中光學(xué)切片可在線使用 | |
| 在強本底熒光下可靠地檢測標(biāo)記 | 自動選擇柵格，優(yōu)化每一顆物鏡的對比度 | |
| 多種觀察技術(shù)結(jié)合使用 | 熒光通道、明場、DIC和相襯任意組合 個性化配置每一個熒光通道，可作為光學(xué)切片或?qū)拡鰣D像 | |
| 活細(xì)胞成像 | 減少光毒性 | 結(jié)合使用LED照明和高敏度相機（如蔡司Axiocam）后，光毒性更低 |
| 延時圖像 | 根據(jù)曝光時間的不同，速度可達每秒三張圖像 “連拍模式”下幀速加倍 | |
| 振動切片機切片，組織學(xué)樣品 | 三維成像 | 為每一顆物鏡自動選擇匹配的柵格 |
| 更改光片切片厚度 | 可根據(jù)試樣自由選擇柵格 | |
| 穿透深度 | 取決于組織的光密度 | |
| 三維重建 | 通過集成軟件功能渲染圖像 自動傳輸單個熒光通道的參數(shù) | |
| 定量分析 | 通過自動系統(tǒng)校準(zhǔn)可重復(fù)測量尺寸 | |
| 全樣載片 | 三維成像 | 多通道，Z軸序列，延時，去卷積，原始數(shù)據(jù)模式中的圖像，3D渲染 |
| 大圖像區(qū)域 | 使用“拼圖和位置”自動獲取大切片圖像 |
蔡司Apotome 3應(yīng)用案例
果蠅神經(jīng)元
分子和發(fā)育基因?qū)W，比利時魯汶大學(xué)
果蠅神經(jīng)元，藍(lán)色：DAPI，黃色：GFP。物鏡：Plan-Apochromat 20×/0.8。視頻由比利時魯汶大學(xué)分子和發(fā)育基因?qū)W的M. Koch提供。
左圖：傳統(tǒng)寬場熒光。右圖：蔡司光學(xué)切片Apotome 3
