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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

shēng huà shì jì 100bp DNA Ladder I 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 100bp DNA Ladder Ⅱ 容量： 100克

shēng huà shì jì 1000ul吸頭 容量： 保存：-20℃ 1KU

shēng huà shì jì 1000ul無菌盒裝吸頭 容量： 保存：-20℃ 1毫克

shēng huà shì jì 1000ul盒裝吸頭 容量： 1KU

shēng huà shì jì 1000ul盒裝無菌帶濾芯吸頭 容量： 保存：-20℃ 500U

shēng huà shì jì 1000ul袋裝無菌濾芯吸頭 容量： 500ug

shēng huà shì jì 1.8ml外旋凍存管 容量： 2～8℃ 250毫克

shēng huà shì jì 1.8ml內(nèi)旋凍存管 容量： 500U

shēng huà shì jì 1.8cm細胞刀 容量： 保存：-20℃ 1克

R5421 感受態(tài)細胞 100ul*5shēng huà shì jì 1.5ml離心管盒 容量： 100KU

shēng huà shì jì 1.5ml離心管 容量： 保存：-20℃ 150u

shēng huà shì jì 1.5ml凍存管 容量： 1.2KU

shēng huà shì jì 1.4-雙（5-苯基-2-惡唑）苯 容量： 2.5升

shēng huà shì jì 1.2ml凍存管 容量： 2～8℃ 500u

shēng huà shì jì 1,8-二羥基蒽醌 容量： 100克

shēng huà shì jì 1，7-庚二胺 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 1，6-己二醇 容量： 100克

shēng huà shì jì 1，5-萘二磺酸四水物 容量： 500克

shēng huà shì jì 1，5-萘二磺酸鈉 容量： 2～8℃ 10克

shēng huà shì jì 1，5-萘二磺酸 容量： 100克

shēng huà shì jì 1,5-二羥基萘 容量： 100克

shēng huà shì jì 1,4-雙(5-苯基-2-噁唑基)苯 容量： 2.5升

shēng huà shì jì 1,4-二氧六環(huán) 容量： RT 10克

shēng huà shì jì 1，4-二溴丁烷 容量： 2～8℃ 100毫克

shēng huà shì jì 1,4-二羥基萘 容量： RT 10克

shēng huà shì jì 1,4-二羥基蒽

A-498(人腎癌細胞) 5×106cells/瓶×2

A875(人黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2

AM(人腺樣囊性癌細胞（高轉(zhuǎn)移）) 5×106cells/瓶×2

BC-009(人細胞癌細胞) 5×106cells/瓶×2

BC-019(人細胞癌細胞) 5×106cells/瓶×2

BC-020(人細胞癌細胞) 5×106cells/瓶×2

BC-021(人細胞癌細胞) 5×106cells/瓶×2

BC-022(人細胞癌細胞) 5×106cells/瓶×2

BE(2)-M17(人神經(jīng)母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2

BGC-803(人胃癌細胞) 5×106cells/瓶×2

C918(人眼脈絡黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2

CAL-27(人舌鱗癌細胞) 5×106cells/瓶×2

LS 180(人結腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2

CNE-2Z(人鼻咽癌細胞) 5×106cells/瓶×2

COLO 201(人結直腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2

CW-2(人結腸癌細胞) 5×106cells/瓶×2

CRT(人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞) 5×106cells/瓶×2

D283 Med(人腦髓母細胞瘤細胞) 5×106cells/瓶×2

EA.hy926(人臍靜脈細胞融合細胞) 5×106cells/瓶×2

ECV-304(人臍靜脈內(nèi)皮細胞) 5×106cells/瓶×2

EJ(人膀胱癌細胞) 5×106cells/瓶×2

H-97(人高轉(zhuǎn)移肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2

HCC94(人子宮鱗癌細胞（高分化）) 5×106cells/瓶×2

HCCLM3(人高轉(zhuǎn)移肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2

HEL(人紅白細胞白血病細胞) 5×106cells/瓶×2

HELF(人胚肺成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2

HO-8910PM(人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細胞) 5×106cells/瓶×2

Ishikawa(人子宮內(nèi)膜癌細胞) 5×106cells/瓶×2

L-O2(人正常肝細胞) 5×106cells/瓶×2

M1(小鼠白血病細胞) 5×106cells/瓶×2

M14(人黑色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2

MA-891(小鼠細胞癌高轉(zhuǎn)移細胞) 5×106cells/瓶×2

MDA-MB-435(人細胞癌高轉(zhuǎn)移細胞) 5×106cells/瓶×2

MDA-MB-468(人細胞癌細胞) 5×106cells/瓶×2

25克

注意事項:

1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時應輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細胞能夠被1         ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
 5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。