當前位置:上海莼試生物技術有限公司>>細胞培養(yǎng)>>細胞株>> T25m2HEp-2人喉表皮癌細胞操作
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
產品名稱 | HEp-2人喉表皮癌細胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963220 |
描述:(1)公司可提供新鮮或凍存細胞株;(2)細胞株數(shù)量約 5×105/瓶;(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮細胞株,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃制造,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
1000023-04-0 Voruciclib 1mg Semen persicae桃仁探針法PCR鑒定試劑盒
1000023-04-0 Voruciclib 5mg Semen persicae桃仁探針法PCR鑒定試劑盒
1000023-04-0 Voruciclib 10mg Lignum santali albi檀香探針法PCR鑒定試劑盒
1000025-07-9 Vadadustat 5mg Lignum santali albi檀香探針法PCR鑒定試劑盒
1000025-07-9 Vadadustat 10mg Radix pseudostellariae太子參探針法PCR鑒定試劑盒
2-Amino-9H-fluoren-9-one 3096-57-9 中文名:2-氨基-9H-芴-9-酮 分子式:C13H9NO 度:99.0% 關鍵詞: 小鼠活化素A(Activin-A)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
2-Amino-6-methylbenzothiazole 2536-91-6 中文名:2-氨基-6并噻唑 分子式:C8H8N2S 度:98.0% 小鼠活化蛋白C(APC)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
2-Amino-6-ethoxybenzothiazole 94-45-1 中文名:2-氨基-6-乙氧基苯并噻唑 分子式:C9H10N2OS 度:99.0% 關鍵詞: 小鼠黃體生成素(LH)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
2-Amino-6-chloropurine 10310-21-1 中文名:2-氨基-6-氯嘌呤 分子式:C5H4ClN5 度:98.0% 關鍵詞: 小鼠環(huán)0酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
2-Amino-6-chlorobenzothiazole 95-24-9 中文名:2-氨基-6-氯苯并噻唑 分子式:C7H5ClN2S 度:99.0% 關鍵詞: 小鼠環(huán)0酸鳥苷(cGMP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
HEp-2人喉表皮癌細胞操作102185-38-6 Boc-Arg(Mts)-OH 1g Ophiocordyceps Sinensis冬蟲夏草染料法PCR鑒定試劑盒
102185-38-6 Boc-Arg(Mts)-OH 5g Ophiocordyceps Sinensis冬蟲夏草染料法PCR鑒定試劑盒
102185-45-5 Boc-D-N-Me-Phe.DCHA 25g Flos caryophylli丁香染料法PCR鑒定試劑盒
102185-45-5 Boc-D-N-Me-Phe.DCHA 5g Flos caryophylli丁香染料法PCR鑒定試劑盒
102185-49-9 5-Bromo-4-chloro-1H-indol-3-yl phosphate . dipotassium salt 1g Radix sanguisorbae地榆染料法PCR鑒定試劑盒
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內容的真實性、準確性和合法性由相關企業(yè)負責,儀表網(wǎng)對此不承擔任何保證責任。
溫馨提示:為規(guī)避購買風險,建議您在購買產品前務必確認供應商資質及產品質量。